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          人科研(Coronaviruses IgG)ELISA試劑盒實驗原理

          點擊次數:112 發布時間:2022/6/17
          提 供 商: 上海研生生化試劑有限公司 資料大?。?/td>
          圖片類型: 下載次數: 1
          資料類型: OCX 瀏覽次數: 112
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          人科研(Coronaviruses IgG)ELISA試劑盒說明書

           


          試驗原理:


          是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將待測物質和生wu素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系。

          分析類型:夾心ELISA


          樣本類型:血清、血漿、組織、尿液、及相關液體等樣本


          產品型式:48/96孔板,可拆


          貯存方法:試劑盒未拆開,4℃保存。已拆開,標準品-20℃保存,其它4℃保存。


          運輸條件:4℃


          樣本體積:50μl

          人科研(Coronaviruses IgG)ELISA試劑盒自備材料


          1)蒸餾水。


          2)酶標儀(450nm)


          3)高精度加樣及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL


          4)振蕩器及磁力攪拌器等。5)37℃恒溫箱。


           

          安全性


          1)避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。


          2)實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。


          3)不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。



          人科研(Coronaviruses IgG)ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法


          1)血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。


          2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。


          3)細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。


          4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液


          5)保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。


           

          試劑的準備


          1)標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。


          2)洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。


           

          操作步驟


          1)使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。


          2)根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。


          3)加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生wu素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。


          4)甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。


          5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。


          6)甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。


          7)每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。


          8)取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。


          9)在450nm波長處測定各孔的OD值。


           


          人科研(Coronaviruses IgG)ELISA試劑盒局限


          6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到精確的結果。


           

          性能


          1. 靈敏度:最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。


          2. 特異性:不與其它細胞因子反應。


          3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。


           


          結果判斷與分析


          1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值


          2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的待測物質標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的待測物質含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。


           

          實驗原理: 用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗體的微孔中依次加入標本或者標準品、生wu素化的抗體、HRP-標記的親和素,經過徹底洗滌后用底物顯色。底物在過氧化物酶的催化下轉化成藍色, 并在酸的作用下轉化成最終的黃色。 顏色的深淺和樣品中的目標蛋白呈正相關。用酶標儀在(450nm)波長下測定測定OD值(吸光度),計算樣品濃度。


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